Promega Tris Base, Molecular Biology Grade (H5135) 中文使用說明書

一、 產品描述

1. 產品基本信息

•   品牌名稱： Promega（普洛麥格）

•   產品名稱： Tris Base, Molecular Biology Grade（三羥甲基氨基甲烷，分子生物學級）

•   中文別名： Tris堿、氨基丁三醇、緩血酸胺、三(羥甲基)氨基甲烷

•   英文別名： Tris, THAM, Tromethamine, Trizma Base

•   產品貨號： H5135

•   CAS號： 77-86-1

•   分子式： C?H??NO?

•   分子量： 121.14 g/mol

•   外觀性狀： 白色結晶或結晶性粉末（晶體堿）

•   常見規格： 通常以2.5kg大包裝為主（具體規格請以實際收貨為準）

2. 核心理化指標

本產品屬于Promega嚴苛管控的分子生物學級（Molecular Biology Grade）試劑，每一批次均經過嚴格的質量檢測，以確保其在高靈敏度的分子生物學實驗中表現優異。其核心理化指標如下：

•   純度（Purity）： ≥ 99.9%

•   1M水溶液pH值（25℃）： 10.0 – 11.5

•   紫外吸光度（A260, 1M）： ≤ 0.05

•   紫外吸光度（A280, 1M）： ≤ 0.05

•   水分含量（Moisture）： ≤ 0.2%

•   重金屬及雜質控制：

    ?   鉛（Lead）：≤ 2 ppm

    ?   鎂（Magnesium）：≤ 1 ppm

    ?   鈣（Calcium）：≤ 1 ppm

    ?   鐵（Iron）：≤ 1 ppm

•   熔點（Melting Point）： 167 – 172℃

•   生物酶活性檢測： 每一批次均經過嚴格質檢，保證不含DNase（脫氧核糖核酸酶）、RNase（核糖核酸酶）及蛋白酶活性。

二、 產品特點

Promega Tris Base (H5135) 憑借其高的純度和嚴格的質控標準，在生命科學研究領域具有以下顯著特點：

1. 化學純度與極低的雜質殘留

在分子生物學實驗中，試劑的純度往往決定了實驗的成敗。本產品純度高達99.9%，且嚴格控制了鉛、鎂、鈣、鐵等金屬離子的含量（均不超過2ppm）。這種級別的純度能夠有效避免因金屬離子螯合作用干擾酶活性，或因雜質引發的化學反應偏差，為高精度實驗提供堅實保障。

2. 超低的紫外背景吸收

本產品在1M濃度下的A260和A280吸光度均控制在0.05以內。這一特性極其關鍵，因為在核酸（DNA/RNA）和蛋白質濃度測定（如Nanodrop分光光度計檢測）時，緩沖液本身的紫外吸收會直接影響檢測基線的準確性。使用該級別的Tris Base，能夠大幅降低背景噪音，確保樣品濃度測定的真實性與可靠性。

3. 嚴格的核酸酶與蛋白酶去除驗證

這是本產品區別于普通化學級或分析級Tris的最核心特點。Promega承諾每一批次H5135均經過功能性檢測，確保不含DNase、RNase及蛋白酶。在涉及RNA提取、cDNA合成、質粒構建、Western Blot等對生物大分子完整性要求高的實驗中，使用該產品能從源頭上切斷外源性核酸酶污染的風險，保障珍貴樣本的完整性。

4. 物理穩定性與溶解性

本品為結晶狀固體，相對不易吸潮（non-hygroscopic），易于準確稱量。其極易溶于水，在水溶液中能迅速解離，便于快速配制各種濃度的儲備液和緩沖工作液。

三、 儲存條件與穩定性

為了保持產品的最佳性能，請務必遵守以下儲存與使用條件：

•   儲存溫度： 建議在15℃至30℃（即常溫/室溫，Room Temperature）下儲存。

•   儲存環境： 請將產品密封保存在原裝容器中，置于干燥、陰涼、通風良好的地方。避免陽光直射及高溫高濕環境。

•   避光要求： 雖然Tris本身對光相對穩定，但為了防止潛在的雜質光解或容器老化，建議存放在避光的試劑柜中。

•   開封后處理： 由于Tris Base具有較強的吸濕性，雖然本產品相對不易吸潮，但長期暴露在潮濕空氣中仍有可能吸附少量水分，導致稱量誤差或局部結塊。因此，建議在干燥器旁或在低濕度環境下進行稱量，開封后應盡快蓋緊瓶蓋。

•   保質期： 在正確儲存且未受污染的密封狀態下，本產品擁有較長的保質期。請參考瓶身標簽上的具體有效期，過期產品若性狀發生改變（如出現明顯結塊、變色或有異味），請勿繼續使用。

四、 工作原理與化學性質

要深入理解Tris Base在實驗中的作用，我們需要從其化學結構和工作原理入手。

1. 化學結構與緩沖機制

Tris的化學名稱為三羥甲基氨基甲烷，其分子結構中包含一個氨基（-NH?）和三個羥甲基（-CH?OH）。在水溶液中，氨基可以結合水分子釋放出的質子（H?），形成帶正電的銨根離子（-NH??），從而消耗溶液中的游離氫離子。根據亨德森-哈塞爾巴爾赫方程（Henderson-Hasselbalch equation），Tris作為一種弱堿，其有效緩沖范圍在pH 7.0至9.2之間，在25℃時其pKa值為8.1。

簡單來說，當向Tris Base的水溶液中加入強酸（如濃鹽酸）時，部分Tris分子會被質子化。此時，溶液中同時存在質子化的Tris-H?（共軛酸）和未質子化的Tris（共軛堿）。當外界有少量酸或堿進入溶液時，這對共軛酸堿對能夠迅速通過釋放或結合氫離子，抵消pH的變化，從而維持溶液酸堿度的動態平衡。

2. 溫度與濃度對pH的影響

使用Tris緩沖液時，有一個重要的物理化學特性需要注意：Tris的pKa值受溫度影響顯著。通常情況下，溫度每下降1℃，Tris緩沖液的pH值大約會上升0.03個單位（反之亦然）。因此，在精密實驗中，如果緩沖液從室溫降溫至冰上操作，其實際pH值會略高于標定pH值。此外，緩沖液的pH值也會隨著濃度的稀釋而發生輕微偏移。因此，在配制高精度的Tris緩沖液時，建議在最終使用溫度下進行pH調節，并使用經過校準的高精度pH計。

五、 解決的實驗問題與應用場景

Tris Base被譽為生命科學實驗室的“萬金油"，其分子生物學級的高度純凈特性，為解決以下實驗痛點提供了有力支持：

1. 解決核酸降解與外源酶污染問題

在RNA提取、反轉錄（RT-PCR/qPCR）以及質粒DNA提取實驗中，樣本極易受到環境中RNase和DNase的降解。普通的化學試劑可能攜帶微量的酶活性，而Promega H5135經過嚴格的核酸酶檢測，解決了因試劑引入外源性核酸酶導致珍貴樣本降解、實驗重復性差的根本性難題，是RNA相關研究的理想選擇。

2. 消除光譜檢測中的背景干擾

在進行核酸和蛋白定量、熒光定量PCR（qPCR）以及酶動力學研究時，緩沖液如果在紫外光區有吸收，會產生假陽性信號或基線漂移。本產品極低的A260/A280值，解決了緩沖液自身引起光譜干擾的問題，確保研究人員能夠獲得真實的樣品信號。

3. 維持生物大分子的天然構象與活性

蛋白質和核酸的功能高度依賴于其三維空間結構，而結構的穩定性直接受環境pH值調控。Tris緩沖液因其離子強度和pH值的適中可控，能夠為酶促反應（如限制性內切酶酶切、連接酶反應、聚合酶擴增等）提供溫和且穩定的微環境，解決因pH波動導致酶活性降低或生物大分子變性的問題。

4. 主要應用場景包括但不限于：

•   核酸電泳： 作為TAE（Tris-乙酸-EDTA）和TBE（Tris-硼酸-EDTA）電泳緩沖液的核心骨架，用于DNA和RNA的瓊脂糖凝膠電泳。

•   蛋白質電泳： 制備Tris-Glycine或Bis-Tris電泳緩沖系統，用于SDS-PAGE蛋白電泳及后續的Western Blot轉膜實驗。

•   核酸提取與儲存： 配制TE緩沖液（Tris + EDTA），用于核酸的長期穩定儲存，EDTA負責螯合二價金屬離子以滅活核酸酶，而Tris負責維持pH中性偏堿。

•   細胞裂解與免疫沉淀： 作為細胞裂解液（Lysis Buffer）的基礎成分，用于提取細胞內的總蛋白或特定復合物。

•   蛋白質結晶學研究： 在不同pH條件下誘導蛋白質結晶。

六、 使用方法與配制指南

1. 準備工作與安全防護

•   個人防護： Tris Base固體粉末對呼吸道、皮膚和眼睛有刺激性。在操作前，請務必穿戴實驗服、佩戴護目鏡以及防塵口罩或防毒面具，并戴上一次性丁腈手套。

•   器具準備： 準備好電子分析天平、潔凈的玻璃燒杯或塑料量筒、磁力攪拌器、精密pH計（需提前用標準緩沖液校準）、去離子水或超純水。

•   稱量環境： 建議在通風櫥內或超凈工作臺內進行稱量和初步溶解，以減少粉塵飛揚和交叉污染。

2. 基礎1M Tris-HCl緩沖液的配制（通用模板）

絕大多數含有Tris的實驗體系，都是先將Tris Base配制成1M的母液，再根據需求稀釋或直接使用。以下是配制1升1M Tris-HCl緩沖液的標準操作流程：

•   計算與稱量： Tris Base的分子量為121.14 g/mol。若要配制1升1M的溶液，需準確稱取121.14克的Tris Base固體粉末。

•   初步溶解： 將稱好的Tris Base倒入潔凈的燒杯中，加入約800 mL的去離子水。開啟磁力攪拌器，直至所有固體粉末全溶解。

•   pH調節（關鍵步驟）： 

    1. 將pH電極插入溶液中。

    2. 一邊攪拌一邊緩慢滴加濃鹽酸（HCl，通常為12 M或6 M）。

    3. 觀察pH讀數變化。由于Tris Base初始pH約為10.5，加入鹽酸后會迅速下降。

    4. 當接近目標pH值時（例如目標pH 8.0或7.4），改為逐滴加入鹽酸，以免調過頭。

    5. 注意： 理想的做法是將溶液溫度調整至實驗最終使用的溫度后再進行pH定標。

•   定容： 當pH值穩定在目標值后，將溶液轉移至1000 mL的容量瓶中，用去離子水反復洗滌燒杯，洗滌液一并倒入容量瓶，最后加水定容至1000 mL刻度線。

•   分裝與滅菌（可選）： 將配制好的1M Tris-HCl母液分裝到合適體積的離心管或試劑瓶中。若需要進行高溫高壓滅菌（通常在121℃滅菌15-20分鐘），請注意滅菌后pH值可能會有輕微改變（通常略微下降），非嚴格無菌實驗可不滅菌，或通過0.22 μm濾膜過濾除菌。

3. 常用衍生緩沖液的快速配制思路

在擁有了高純度的Tris Base (H5135) 后，您可以輕松搭建以下經典實驗體系：

•   TE緩沖液（用于核酸儲存）： 取10 mL 1M Tris-HCl (pH 8.0) 和 2 mL 0.5M EDTA (pH 8.0)，加去離子水定容至1000 mL。

•   TAE電泳緩沖液（50X儲存液）： 稱取242 g Tris Base、57.1 mL 冰乙酸、100 mL 0.5M EDTA (pH 8.0)，加去離子水定容至1000 mL。使用時稀釋50倍。

•   TBE電泳緩沖液（5X儲存液）： 稱取54 g Tris Base、27.5 g 硼酸、20 mL 0.5M EDTA (pH 8.0)，加去離子水定容至1000 mL。使用時稀釋5倍。

•   SDS-PAGE電泳緩沖液（10X儲存液）： 稱取30.3 g Tris Base、144.1 g 甘氨酸、10 g SDS，加去離子水定容至1000 mL。

七、 常見問題分析與解決方案

在長期的科研實踐中，即使使用了高質量的試劑，實驗人員仍可能遇到各種疑難雜癥。以下是針對Tris Base及相關緩沖液使用中常見問題的深度剖析與解決方案：

1. 為什么配制的Tris緩沖液pH值總是調不準？

•   原因分析： 

    ?   使用的pH計未校準或電極老化；

    ?   忽略了溫度對Tris pKa的影響（在低溫下調至pH 8.0的緩沖液，回到室溫時pH可能變成7.8）；

    ?   使用的鹽酸濃度過低，導致滴加體積過大，改變了溶液的總體積。

•   解決方案： 使用前務標準緩沖液對pH計進行兩點或三點校準；盡可能在實驗體系的終端溫度下進行pH調節；建議儲備一瓶濃鹽酸（如12 M），少量多次地進行滴加。

2. 為什么我的RNA樣品總是莫名其妙地降解了？

•   原因分析： 

    ?   雖然使用了無酶級別的Tris Base，但配制過程中使用的去離子水含有RNase；

    ?   配制容器或磁力攪拌子未進行RNase去除處理（如使用DEPC水處理或高溫烘烤）；

    ?   操作環境中存在氣溶膠或非無酶耗材的交叉污染。

•   解決方案： 確認所有接觸液體的器具均為無酶級別；用于RNA實驗的緩沖液建議使用專用水槽和試劑；在配制完TE緩沖液后，可以通過0.22 μm濾膜過濾進一步去除潛在的微生物或酶污染。

3. 為什么在跑瓊脂糖凝膠電泳時，條帶出現微笑效應（Smiling）或擴散？

•   原因分析： 

    ?   電泳緩沖液（TAE/TBE）重復使用次數過多，離子強度耗盡或pH發生改變；

    ?   電泳槽兩端電壓降過大，產熱嚴重，導致凝膠中間與兩邊溫度不一致，從而影響Tris緩沖系統的緩沖能力。

•   解決方案： 定期更換電泳緩沖液，不要一味重復使用；適當降低電泳電壓；確保電泳槽周圍空氣流通，必要時使用帶有循環冷卻系統的電泳槽。

4. 長期儲存的Tris固體結塊了，還能使用嗎？

•   原因分析： 吸收了空氣中的水分。

•   解決方案： 如果只是表面輕微受潮結塊，且產品在有效期內，可以將其在干燥箱中適度烘干后，仍可正常使用，但由于局部含水量不均可能導致稱量誤差，建議優先使用外觀干燥松散的試劑。如果結塊嚴重且質地堅硬，或者產品已過保質期，為了實驗數據的嚴謹性，建議廢棄處理。

5. 能否用Tris緩沖液替代磷酸鹽緩沖液（PBS）用于細胞培養？

•   原因分析： 兩者化學性質不同。

•   解決方案： 通常不建議直接替代。Tris緩沖液具有一定的細胞毒性（因為其容易穿透細胞膜并在胞內發生緩沖作用，擾亂細胞自身的pH穩態），而PBS是基于生理鹽水的等滲緩沖液，更適合維持細胞的滲透壓和生理活性。Tris更多用于細胞裂解后的下游實驗（如蛋白提取），而非直接用于活細胞培養。

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（注：本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）

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